Awọn ọja

Ọna nipasẹ eyiti awọn ipa ti awọn iyipada igbakana darapọ lati yi iṣẹ ṣiṣe enzymatic pada kii ṣe asọtẹlẹ ni rọọrun nitori awọn ipa wọnyi kii ṣe afikun nigbagbogbo ni ọna laini.Nitorinaa, ijuwe ti awọn ipa ti awọn iyipada igbakanna ti awọn iṣẹku amino acid ti o di sobusitireti le ṣe ilowosi pataki si oye ti pato sobusitireti ti awọn ensaemusi.Ninu beta-glycosidase lati Spodoptera frugiperda (Sfbetagly), awọn iṣẹku Q39 ati E451 ṣe ajọṣepọ pẹlu sobusitireti ati pe eyi ṣe pataki fun asọye pato sobusitireti.Ilọpo meji ti Sfbetagly (A451E39, S451E39 ati S451N39) ni a pese sile nipasẹ mutagenesis ti o darí aaye, ti a fihan ninu awọn kokoro arun ati ti sọ di mimọ nipa lilo chromatography ijora.Awọn enzymu wọnyi ni a ṣe afihan nipa lilo p-nitrophenyl beta-galactoside ati p-nitrophenyl beta-fucoside bi awọn sobusitireti.Iwọn k cat/Km fun ẹyọkan ati awọn ẹda meji ti Sfbetagly ti o ni awọn iyipada ti o ni itọsọna aaye ni awọn ipo Q39 ati E451 ni a lo lati ṣe afihan pe ipa lori agbara ọfẹ ti ESdouble dagger (epo ipo iyipada enzyme-transition) ti awọn iyipada meji (Gdouble). daggerxy) kii ṣe akopọ awọn ipa ti o waye lati awọn iyipada ẹyọkan (Gdouble daggerx ati Gdouble daggery).Iyatọ yii ni Gdouble dagger tọkasi pe awọn ipa ti awọn iyipada ẹyọkan ni agbekọja ni apakan.Nitorinaa, ipa ti o wọpọ yii jẹ kika ni ẹẹkan ni Gdouble daggerxy.Awọn data Crystallographic lori beta-glycosidases ṣe afihan wiwa ifunmọ hydrogen bidentate kan ti o kan awọn iṣẹku Q39 ati E451 ati ẹgbẹ hydroxyl kanna ti sobusitireti.Nitorinaa, mejeeji thermodynamic ati data crystallographic daba pe awọn iṣẹku Q39 ati E451 ṣe ipa ipa-ọna kan lori awọn ibaraenisọrọ oniwun wọn pẹlu sobusitireti.