Awọn ọja

Tris acetate iyọ ti wa ni nigbagbogbo lo ni igbaradi ti TAE (Tris-acetate-EDTA) buffer, eyi ti o ti lo bi a nṣiṣẹ saarin ati ni agarose gels.Tris Acetate-EDTA buffer jẹ lilo fun DNA agarose gel electrophoresis ṣugbọn o tun lo fun ti kii-denaturing RNA agarose gel electrophoresis.DNA ti o ni okun-meji duro lati ṣiṣẹ yiyara ni TAE ju ni awọn ifipamọ miiran ati pe o le rẹwẹsi lakoko elekitirophoresis ti o gbooro sii.Isan kaakiri tabi rirọpo saarin lakoko elekitirophoresis ti o gbooro le ṣe atunṣe agbara ifisi isalẹ.O le ṣee lo ni ọpọlọpọ awọn ifọkansi lati ṣe iwadi iṣipopada DNA ni ojutu.Niwọn igba ti borate ni ifipamọ TBE (Tris-Borate-EDTA Buffer, 10X Powder Pack, sc-296651) jẹ inhibitor ti o lagbara fun ọpọlọpọ awọn enzymu, a ṣe iṣeduro buffer TAE nigbati o n wo awọn ohun elo enzymatic fun ayẹwo DNA.Tris acetate iyọ tun jẹ ifipamọ pẹlu ifamọ giga ni awọn idanwo ATP pẹlu firefly luciferase.

Nlo: saarin ṣiṣiṣẹ TAE jẹ ifipamọ ti o wọpọ julọ fun DNA agarose gel electrophoresis, ati pe o tun lo fun abinibi RNA agarose gel electrophoresis.DNA ti o ni okun-meji duro lati gbe yiyara ni TAE ju ni awọn buffers miiran, ṣugbọn tun kuna lati we nitori idinku awọn ions saarin lakoko elekitirophoresis gigun.Gigun kẹkẹ ẹlẹṣin tabi paṣipaarọ saarin lakoko electrophoresis gigun le sanpada fun agbara ifipamọ isalẹ.2 Dina ifipamọ TAE ti o ni idojukọ lati gba 1 mMTAE ifipamọ ti o ni 40 mM Tris acetate ninu ati 1 mM EDTA, pH 8.3.1 mMTAE saarin le ṣee lo mejeeji ni awọn gels agarose ati bi ifipamọ nṣiṣẹ.Fun ipinnu ti o pọju, o gba ọ niyanju pe foliteji ti a lo jẹ kekere ju 5V/cm (ijinna laarin awọn amọna ẹyọ).

Ohun elo: saarin ti nṣiṣẹ TAE jẹ ifipamọ ti o wọpọ julọ fun DNA agarose gel electrophoresis ni Geli Kemikali, ati pe o tun lo fun ti kii ṣe denaturing RNA agarose gel electrophoresis.DNA ti o ni okun-meji duro lati gbe yiyara ni TAE ju ni awọn buffers miiran, ṣugbọn tun kuna lati we nitori idinku awọn ions saarin lakoko elekitirophoresis gigun.Gigun kẹkẹ ẹlẹṣin tabi paṣipaarọ saarin lakoko electrophoresis gigun le sanpada fun agbara ifipamọ isalẹ.Ifipamọ TAE ti o ni idojukọ jẹ ti fomi lati gba 1 mMTAE ifipamọ ti o ni 40 mM Tris acetate ninu ati 1 mM EDTA, pH 8.3.1 mMTAE saarin le ṣee lo mejeeji ni awọn gels agarose ati bi ifipamọ nṣiṣẹ.Fun ipinnu ti o pọju, o gba ọ niyanju pe foliteji ti a lo jẹ kekere ju 5V/cm (ijinna laarin awọn amọna ẹyọ).

Nlo: Ni wiwa ATP pẹlu firefly luciferase, ọja yii jẹ ifipamọ ifura julọ;glutamate abuda erin.

Isomọ abuda ti [3H] l-glutamic acid si awọn ohun elo ti kii ṣe olugba.

[3H] L-glutamic acid abuda si awọn tubes microfuge ati gilasi ni a ṣewadii ni awọn ifipamọ mẹrin.Isopọ abẹlẹ si awọn ohun elo wọnyi jẹ aifiyesi, ṣugbọn o pọ si nipasẹ centrifugation tabi afamora ni Tris-HCl ati Tris-citrate buffer.Asopọmọra yii kere pupọ tabi Nigbati HEPES-KOH, tabi saarin Tris-acetate dipo ti a lo dipo.[3H] L-glutamate abuda si awọn tubes microfuge ni idinamọ nipasẹ L-ṣugbọn kii ṣe D-isomers ti glutamate ati aspartate.DL-2-amino-7-phosphonoheptanoic acid tun ko dojuti ìde.Awọn agbo ogun miiran ti o ṣe afihan kekere si idinamọ iwọntunwọnsi ni: N-methyl-D-aspartate, quisqualate, L-glutamic acid diethyl ester, N-methyl-L-aspartate, kainate, ati 2-amino-4-phosphonobutyrate.Asopọmọra jẹ idinamọ nipasẹ awọn membran ọpọlọ eku denatured.Asopọmọra glutamate ti o gbẹkẹle amuaradagba [3H] ni a gba pẹlu igbaradi awo-ara ti o tutu leralera nigba ti isọdọmọ ti ṣe ni ifipamọ Tris-acetate.A ṣe iṣeduro pe Tris-acetate tabi HEPES -KOH buffer yẹ ki o lo ni glutamate bin ding assay.Ti a ba lo Tris-HCl tabi Tris-citrate saarin, idanwo iṣakoso ti o yẹ yẹ ki o ṣe lati ṣe atunṣe fun sisopọ si awọn tubes microfuge tabi awọn asẹ fiber gilasi.