Awọn ọja

Ṣiṣayẹwo ti awọn iṣẹlẹ phosphorylation jakejado proteome tun jẹ ipenija itupalẹ pataki nitori idiju nla ti awọn nẹtiwọọki phosphorylation amuaradagba.Ninu iṣẹ yii, a ṣe iṣiro ibaramu ti Lys-N, Lys-C, ati trypsin pẹlu iyi si agbara wọn lati ṣe alabapin si itupalẹ agbaye ti phosphoproteome.Ẹya ti a ti tunṣe ti paṣipaarọ cation lagbara kekere pH ni a lo lati yasọtọ daradara N-terminally acetylated, phosphorylated, ati awọn peptides ti kii ṣe atunṣe.Apapọ 5036 awọn phosphopeptides ti kii ṣe apọju ni a le ṣe idanimọ pẹlu oṣuwọn wiwa eke ti <1% lati 1 miligiramu ti amuaradagba nipa lilo apapọ awọn enzymu mẹta.Awọn data wa fi han pe agbekọja laarin awọn eto data phosphopeptide ti ipilẹṣẹ pẹlu awọn proteases oriṣiriṣi jẹ ala, lakoko ti agbekọja laarin awọn eto data data tryptic meji ti o jọra ni a rii pe o kere ju awọn akoko mẹrin ga.Ni ọna yii, lilo afiwera ti Lys-N ati trypsin jẹ ki ilosoke 72% ninu nọmba awọn phosphopeptides ti a rii bi a ṣe afiwe d si trypsin nikan, lakoko ti idanwo ẹda trypsin nikan yori si ilosoke 25%.Nitorinaa, nigba ti idojukọ nikan lori trypsin ati data Lys-N, a ṣe idanimọ 4671 awọn phosphopeptides ti kii ṣe apọju.Itupalẹ siwaju sii ti awọn aaye ti a rii fihan pe awọn eto data Lys-N ati trypsin ti ni imudara ni awọn ero oriṣiriṣi phosphorylation ti o yatọ, ti o fihan siwaju pe awọn isunmọ multiprotease jẹ pataki pupọ ninu awọn itupalẹ phosphoproteome.